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液相色譜儀各個(gè)分支需要注意的事項(xiàng)
點(diǎn)擊次數(shù):2198 更新時(shí)間:2020-10-12
  液相色譜儀是一種分離與分析儀器,其特點(diǎn)是以液體作為流動(dòng)相,固定相可以有多種形式,如紙、薄板和填充床等。在色譜儀發(fā)展的過程中,為了區(qū)分各種方法,根據(jù)固定相的形式產(chǎn)生了各自的命名,如:紙色譜、薄層色譜和柱液相色譜。
  1、色譜儀氘燈:
  色譜儀開始進(jìn)樣前30分鐘開氘燈即可,節(jié)約燈的能量和使用時(shí)間。
  2、流動(dòng)相的使用和注意事項(xiàng):
  ①所用流動(dòng)相必須預(yù)先濾過和脫氣,流動(dòng)相一般貯存于玻璃不銹鋼容器內(nèi)。貯存容器一定要蓋嚴(yán),防止溶劑揮發(fā)引起組成變化。磷酸鹽、乙酸鹽緩沖液很易長(zhǎng)霉,應(yīng)盡量新鮮配制使用,不要長(zhǎng)期貯存。容器應(yīng)定期清洗,特別是盛水、緩沖液和混合溶液的瓶子,以除去底部的雜質(zhì)沉淀和可能生長(zhǎng)的微生物。
 ?、谂渲屏鲃?dòng)相用水需為純凈水或經(jīng)超聲過濾后的純化水,流動(dòng)相配制好后先用直徑為5cm,孔徑為0.45um的濾膜,通過沙芯過濾器的過濾,然后在超聲儀上超聲。
 ?、鄄坏脤⒀b流動(dòng)相的容器直接放置與超聲儀內(nèi),需放與篩網(wǎng)上進(jìn)行超聲。
  3、六通閥的使用和維護(hù)注意事項(xiàng):
  ①樣品溶液進(jìn)樣前必須用濾膜過濾,以減少微粒對(duì)進(jìn)樣閥的磨損。
  ②轉(zhuǎn)動(dòng)閥芯時(shí)不能太慢,更不能停留在中間位置,否則流動(dòng)相受阻,使泵內(nèi)壓力劇增,甚至超過泵的Zda壓力;再轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位時(shí),過高的壓力將使柱頭損壞。
 ?、蹫榉乐咕彌_鹽和樣品殘留在進(jìn)樣閥中,每次色譜儀分析結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣閥。通??捎盟疀_洗,或先用能溶解樣品的溶劑沖洗,再用水沖洗。
  4、色譜柱柱壓升高的主要因素:
  ①泵的單向閥堵塞。
 ?、谏V柱的入口篩板堵塞。
 ?、畚鼮V頭堵塞。
 ?、躊EEK管接口處堵塞。
  5、色譜柱柱壓不穩(wěn)的因素:
 ?、?strong>液相色譜儀泵內(nèi)有空氣。
 ?、诒妹芊鈮|損壞。
 ?、廴軇┲械臍馀?。
 ?、芟到y(tǒng)檢漏,找出漏點(diǎn)。
  6、樣品峰保留時(shí)間漂移的主要因素:
 ?、偈覂?nèi)溫度變化過大。
 ?、诹鲃?dòng)相成分發(fā)生變化。
 ?、凵V儀色譜柱未平衡好。
  ④色譜儀泵中有氣泡。
  ⑤該流動(dòng)相是否適宜此樣品的檢測(cè)。
  7、基線漂移的主要因素:
 ?、僦鶞夭▌?dòng)。
 ?、诹鲃?dòng)相不均勻。
 ?、哿魍ǔ乇晃廴净蛴袣怏w。
 ?、苌V儀檢測(cè)器出口阻塞。
 ?、萘鲃?dòng)相配比不當(dāng)或流速變化。
 ?、蘖鲃?dòng)相污染、變質(zhì)。
 ?、呤褂醚h(huán)溶劑。
  8、色譜儀檢測(cè)器靈敏度不夠的主要因素:
 ?、贅悠愤M(jìn)樣量不足。
  ②波長(zhǎng)設(shè)置不正確。
  ③檢測(cè)器池窗污染。
 ?、軝z測(cè)池中有氣泡。
 ?、蓦妷翰环€(wěn)。
 ?、蘖鲃?dòng)相流速不合適。
  9、色譜柱的使用和維護(hù)注意事項(xiàng):
  ①避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料,因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行,在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過緩。
 ?、趹?yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成,特別是反相色譜中,不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬?,反之亦然?/div>
 ?、垡话阏f來色譜儀色譜柱不能反沖,只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí),才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì)迅速降低柱效。
 ?、苓x擇使用適宜的流動(dòng)相(尤其是pH),以避免固定相被破壞。
  ⑤避免將復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi),需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在色譜儀進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。
 ?、藿?jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱,清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。
 ?、弑4嫔V柱時(shí)應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇,柱接頭要擰緊,防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置至次日或更長(zhǎng)時(shí)間。
  ⑧色譜柱使用過程中,如果壓力升高,一種可能是濾片被堵塞,這時(shí)應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗;另一種可能是大分子進(jìn)入柱內(nèi),使柱頭被污染;如果柱效降低或色譜峰變形,則可能柱頭出現(xiàn)塌陷,死體積增大。
 ?、嵋怨枘z為基質(zhì)的填料,只能在pH2~9范圍內(nèi)使用。色譜儀每次分析檢測(cè)完成后,*用洗脫能力強(qiáng)的洗脫液沖洗,例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡。
  10、色譜儀樣品:
  液相色譜儀樣品必須用直徑為2.5cm,孔徑為0.45um的濾膜針式過濾。如有明確要求需用離心過濾的,經(jīng)離心過濾后取上清液即可。
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